生物专属定制业务
项目齐全
高效快捷
课题服务
远程可控
可溶性蛋白质含量的测定考马斯亮蓝
2024-07-15

  考马斯亮蓝法(Coomassie Brilliant Blue method,也称为Bradford法)是一种快速、简便、灵敏的蛋白质定量方法,由M.M. Bradford在1976年提出。这种方法利用蛋白质分子中的疏水区域与考马斯亮蓝G-250染料结合后,引起染料最大吸收波长的变化这一性质来测定蛋白质含量。

  考马斯亮蓝G-250在游离状态时呈现出红色,最大吸收峰位于约465纳米。当它与蛋白质结合后,染料的颜色变为青色,最大吸收峰移动至595纳米附近。蛋白质与染料的结合导致吸光度的显著增加,而且在一定浓度范围内(通常是0至1000μg/mL),蛋白质-染料复合物的吸光度与蛋白质浓度呈现良好的线性关系。

  考马斯亮蓝法的具体步骤如下:

  标准曲线的制备:首先制备一系列已知浓度的蛋白质标准溶液,然后加入考马斯亮蓝试剂,混合并静置一段时间后,在595纳米波长下测量吸光度。根据吸光度与蛋白质浓度之间的线性关系绘制标准曲线。

  样品处理:将待测样品加入到适当的容器中,然后加入考马斯亮蓝试剂,同样混合并静置相同的时间。

  吸光度测量:使用分光光度计在595纳米波长下测量样品的吸光度。

  计算蛋白质含量:根据样品的吸光度值,对照标准曲线,可以计算出样品中蛋白质的浓度。

  考马斯亮蓝法的优点包括:

  高灵敏度:可以检测低至微克级别的蛋白质。

  快速:反应在几分钟内即可完成。

  操作简单:只需要少量的试剂和简单的仪器设备。

  广泛的适用性:适用于大多数蛋白质。

  然而,该方法也有局限性,如某些还原剂、去污剂和其他化合物可能会影响染料与蛋白质的结合,从而干扰测定结果。因此,e测试提醒在进行蛋白质定量前,应确保样品中没有这些干扰物质,或者采取相应的预处理措施。