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蛋白质差异表达是指在不同生长时期或不同生理病理条件下蛋白质的表达水平存在显著差异的现象,研究蛋白质差异表达可以筛选相关通路的关键蛋白质,揭示生命活动的分子机理,帮助寻找疾病相关的生物标志物等。
1.样品准备:首先,收集不同条件或不同组的样品,并进行蛋白质提取和纯化,以获取高质量的蛋白质样品。
2.蛋白质分析技术:蛋白质差异表达分析常用的技术包括:
• 凝胶电泳技术:
如二维凝胶电泳(2-DE)和等电聚焦(IEF)技术,可以分离和定量蛋白质样品。
• 质谱技术:
如液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS),通过分析蛋白质样品的肽段和质谱谱图,识别和定量蛋白质。
• 蛋白质芯片技术:
利用具有高通量的平台,如蛋白质微阵列芯片,可以同时分析大量蛋白质样品。
• 代谢标记技术:
如蛋白质同位素标记(SILAC)和化学标记(iTRAQ、TMT),通过对蛋白质样品进行标记和定量,揭示蛋白质的差异表达。
3.数据分析和解读:根据蛋白质分析技术产生的数据,进行差异分析和统计学处理,以鉴定和注释差异表达的蛋白质。进一步进行功能富集分析、通路分析和网络分析,揭示蛋白质差异表达的生物学意义。